體外診斷試劑產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審評(píng)報(bào)告

產(chǎn)品中文名稱：胚胎植入前染色體非整倍體檢測試劑盒(可逆末端終止測序法)

產(chǎn)品管理類別：第三類

申請(qǐng)人名稱：北京中儀康衛(wèi)醫(yī)療器械有限公司

國家藥品監(jiān)督管理局?

醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心

基本信息

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一、 申請(qǐng)人名稱

北京中儀康衛(wèi)醫(yī)療器械有限公司

二、申請(qǐng)人住所

北京市大興區(qū)中關(guān)村科技園區(qū)大興生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)基地天榮街19號(hào)院6幢204室

三、生產(chǎn)地址

北京市大興區(qū)中關(guān)村科技園區(qū)大興生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)基地天榮街19號(hào)院6幢204室

技術(shù)審評(píng)概述

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一、產(chǎn)品概述

（一）產(chǎn)品主要組成成分

試劑盒具體組成成分、配套試劑見說明書。

（二）產(chǎn)品預(yù)期用途

本產(chǎn)品用于定性檢測試管嬰兒過程中體外培養(yǎng)胚胎的囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞的脫氧核糖核酸（DNA），通過對(duì)胚胎部分細(xì)胞的DNA進(jìn)行檢測，分析胚胎染色體是否存在非整倍體數(shù)量異常，輔助臨床醫(yī)生判斷胚胎是否植入。

本產(chǎn)品適用于女性年齡38歲及以上進(jìn)行試管嬰兒的患者；夫妻雙方或一方存在染色體異常的患者；三次以上的試管嬰兒植入失敗者；三次以上自然流產(chǎn)患者；生育過染色體異常患兒的夫婦。

檢測結(jié)果僅供參考，不單獨(dú)作為確診的依據(jù)，本產(chǎn)品不用于拷貝數(shù)變異的檢測。

（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格

42測試/盒、96測試/盒

（四）產(chǎn)品檢驗(yàn)原理

該試劑盒是利用全基因組擴(kuò)增技術(shù)對(duì)從囊胚期胚胎獲得的細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，利用可逆末端終止高通量測序技術(shù)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行全基因組測序，通過生物信息軟件對(duì)測序結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，判斷胚胎是否存在染色體非整倍體異常。

胚胎細(xì)胞全基因組擴(kuò)增通過低擴(kuò)增偏好的方式進(jìn)行，以盡可能無偏倚地保持樣本原始DNA信息。擴(kuò)增分三步進(jìn)行：裂解，預(yù)擴(kuò)增和擴(kuò)增。對(duì)胚胎細(xì)胞裂解后，使用具有特殊結(jié)構(gòu)的隨機(jī)引物及配套組分對(duì)基因組進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增，形成結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定的預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物，最后使用與預(yù)擴(kuò)增引物的非隨機(jī)部分的序列匹配的擴(kuò)增引物及配套組分對(duì)基因組進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。

文庫構(gòu)建時(shí)，對(duì)全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行片段化和接頭連接，采用PCR擴(kuò)增的方法對(duì)片段化產(chǎn)物加入標(biāo)簽序列并實(shí)現(xiàn)文庫的富集。最后，通過XP磁珠完成對(duì)文庫的純化，完成文庫構(gòu)建。

該試劑盒結(jié)合可逆末端終止測序技術(shù)和生物信息學(xué)分析方法，基于新一代的高通量測序平臺(tái)，對(duì)胚胎囊胚期活檢細(xì)胞中染色體數(shù)目異常進(jìn)行定性檢測?？赡婺┒私K止測序技術(shù)的檢測過程包括：將不同熒光基團(tuán)標(biāo)記的四種脫氧核苷酸以及DNA聚合酶同時(shí)加入流動(dòng)槽通道中，按堿基互補(bǔ)原理，合成互補(bǔ)的DNA鏈；在堿基延伸過程中，每個(gè)循環(huán)中合成反應(yīng)只能延伸一個(gè)正確互補(bǔ)的堿基，根據(jù)四種不同的熒光信號(hào)確認(rèn)堿基種類，讀取該次反應(yīng)顏色后，堿基保護(hù)基團(tuán)被除去，下一個(gè)反應(yīng)可繼續(xù)進(jìn)行；最終，通過對(duì)所有測序信號(hào)的分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA序列各個(gè)位點(diǎn)不同堿基的序列判定；并結(jié)合生物信息學(xué)分析方法，對(duì)人染色體所屬的DNA片段數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，將統(tǒng)計(jì)的結(jié)果與大量正常樣本構(gòu)成的參考集合相比較，即可獲得檢測樣本中所含染色體DNA片段數(shù)量是否存在異常，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)人胚胎23對(duì)染色體數(shù)目異常的判斷。

二、臨床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的選擇

該試劑盒主要原材料包括：無核酸酶水、裂解液、裂解酶緩沖液、裂解酶、預(yù)擴(kuò)增緩沖液、預(yù)擴(kuò)增酶、擴(kuò)增緩沖液、擴(kuò)增酶、文庫構(gòu)建試劑、PCR擴(kuò)增試劑、標(biāo)簽序列、測序試劑、流動(dòng)槽、雜交緩沖液、PR2反應(yīng)緩沖液及對(duì)照品等。這些原材料均為外購方式獲得，對(duì)照品由細(xì)胞供應(yīng)商提供，并由申請(qǐng)人制備獲得。申請(qǐng)人對(duì)主要原材料進(jìn)行了供應(yīng)商選擇，通過功能性試驗(yàn)，篩選出最佳的原材料供應(yīng)商，制定了主要原材料質(zhì)量要求并經(jīng)檢驗(yàn)合格。

2.企業(yè)參考品和對(duì)照品設(shè)置情況

企業(yè)參考品包括陽性參考品、陰性參考品、嵌合體參考品、數(shù)據(jù)量控制參考品。陽性參考品20份，是由多種染色體非整倍體陽性細(xì)胞樣本組成；陰性參考品3份，是由染色體非整倍體陰性細(xì)胞樣本組成；嵌合體參考品6份，是由兩種不同染色體拷貝數(shù)變異樣本混合制備的細(xì)胞樣本組成；數(shù)據(jù)量控制參考品1份，由YH細(xì)胞樣本組成。

對(duì)照品是由2份陽性對(duì)照品和1份陰性對(duì)照品組成，用于檢測過程中試劑和儀器的質(zhì)量控制。其中陽性對(duì)照品是由染色體非整倍體陽性細(xì)胞樣本（21三體和XO）組成；陰性對(duì)照品是由染色體非整倍體陰性細(xì)胞樣本組成。

（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究

申請(qǐng)人通過使用初步確定的配方進(jìn)行反應(yīng)體系配制，對(duì)反應(yīng)體系中細(xì)胞裂解、預(yù)擴(kuò)增、擴(kuò)增、片段化、PCR擴(kuò)增等步驟，對(duì)標(biāo)簽序列、雜交緩沖液、PR2反應(yīng)緩沖液、上機(jī)文庫濃度、樣本用量等關(guān)鍵步驟進(jìn)行不同反應(yīng)條件的篩選，確定了最優(yōu)的反應(yīng)條件。通過功能性試驗(yàn)和生產(chǎn)工藝研究，確定了最佳的生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系。

（三）分析性能評(píng)估

分析性能評(píng)估內(nèi)容包括樣本穩(wěn)定性、樣本類型的研究分析、染色體非整倍體陽性符合率、微缺失微重復(fù)符合率、陰性符合率、嵌合體符合率、數(shù)據(jù)量控制、重復(fù)性、精密度、分析特異性。

1.樣本穩(wěn)定性研究：申請(qǐng)人對(duì)胚胎細(xì)胞樣本的儲(chǔ)存穩(wěn)定性、凍融次數(shù)進(jìn)行了研究，最終確定細(xì)胞樣本-20±5℃保存時(shí)間不超過3個(gè)月；樣本反復(fù)凍融次數(shù)不超過1次。

申請(qǐng)人對(duì)細(xì)胞樣本的全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物儲(chǔ)存穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，最終確定全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物于-70±10℃或-20±5℃環(huán)境保存不超過2個(gè)月。

2.樣本類型研究：申請(qǐng)人對(duì)樣本用量進(jìn)行了研究，細(xì)胞樣本的樣本用量為1～20個(gè)細(xì)胞時(shí)，均能夠滿足檢測要求?？紤]臨床囊胚活檢樣本的可獲得性，最終確定適用于本產(chǎn)品的囊胚滋養(yǎng)層活檢樣本的細(xì)胞數(shù)目為3～10個(gè)。

3.染色體非整倍體陽性檢測符合率：對(duì)連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒采用16份染色體非整倍體陽性樣本進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果表明染色體非整倍體陽性符合率為100%；使用國家參考品中的非整倍體陽性參考品檢測，符合率100%。

4.微缺失微重復(fù)檢測符合率：該產(chǎn)品對(duì)微缺失微重復(fù)的檢出情況進(jìn)行了分析性能評(píng)估；使用國家參考品中的微缺失微重復(fù)參考品檢測，符合該指標(biāo)。

5.陰性檢測符合率：對(duì)連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒采用7份陰性樣本進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果表明陰性符合率為100%；使用國家參考品中的陰性參考品檢測，符合率? ?100%。

6.嵌合體檢測符合率：對(duì)連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒采用6 ?份嵌合樣本進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果表明對(duì)30% 嵌合的嵌合體樣本符合率達(dá)到30%以上；70%嵌合體符合率達(dá)到60%以上；使用國家參考品中的嵌合體參考品檢測，符合該指標(biāo)。

7.數(shù)據(jù)量控制檢測：對(duì)連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒采用1份企業(yè)數(shù)據(jù)量控制參考品進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果表明數(shù)據(jù)量控制參考品的檢測有效數(shù)據(jù)量不低于1M，基因組覆蓋率不低于4%；使用國家參考品中的數(shù)據(jù)量控制參考品檢測，符合該指標(biāo)。

8.重復(fù)性：對(duì)連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒分別進(jìn)行三次上述的染色體非整倍體陽性檢測符合率試驗(yàn)、微缺失微重復(fù)檢測符合率試驗(yàn)、陰性檢測符合率試驗(yàn)、嵌合體檢測符合率試驗(yàn)、數(shù)據(jù)量控制檢測試驗(yàn)，檢測結(jié)果表明重復(fù)性均滿足技術(shù)要求規(guī)定的性能指標(biāo)。

9.精密度：對(duì)連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒采用企業(yè)參考品分別在兩個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)室、分別選用兩位不同的操作者在兩臺(tái)不同的測序儀進(jìn)行檢測，每批試劑盒檢測三次，檢測結(jié)果表明不同實(shí)驗(yàn)室間重復(fù)性、不同操作者重復(fù)性、不同測序儀重復(fù)性的檢測均滿足技術(shù)要求規(guī)定的性能指標(biāo)。

10.分析特異性：對(duì)連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒采用60份染色體

微缺失微重復(fù)樣本進(jìn)行檢測，均未檢測出非整倍體；對(duì)三批生產(chǎn)的試劑盒采用9份已知存在染色體微缺失微重復(fù)的非整倍體樣本進(jìn)行檢測，均檢測出應(yīng)檢出的非整倍體；檢測結(jié)果表明分析特異性達(dá)到100%。

（四）陽性判斷值或參考區(qū)間研究

申請(qǐng)人采用已知染色體非整倍體陰性樣本構(gòu)建參考數(shù)據(jù)庫，然后采用已知的染色體非整倍體陰性樣本及模擬數(shù)據(jù)建立參考范圍，并用400例已知核型樣本進(jìn)行參考范圍的確定，最終確定的染色體非整倍體陰性樣本的染色體的檢測信號(hào)值（RCid）的參考范圍為12.97＜RCid＜26.97，染色體非整倍體陽性樣本的RCid的參考范圍為：RCid大于等于26.97或小于等于12.97。

具體過程如下，通過350例染色體非整倍體陰性樣本檢測數(shù)據(jù)和4400例染色體組成異常的模擬數(shù)據(jù)構(gòu)建參考數(shù)據(jù)庫，計(jì)算其中每個(gè)樣本的24條染色體的RCid值，利用Z值法對(duì)Rcid值區(qū)間進(jìn)行劃分，并使用該試劑盒對(duì)400例染色體非整倍體陰性樣本和染色體非整倍體陽性樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而最終確定參考值的范圍。

（五）試劑盒穩(wěn)定性研究

申請(qǐng)人對(duì)該試劑盒的長期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，確定了在各種條件下該試劑盒的有效保存時(shí)間。長期穩(wěn)定性試驗(yàn)：取連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒，將試劑盒置于儲(chǔ)存環(huán)境中，分別于第0、3、6、7個(gè)月取出，對(duì)試劑盒的性能指標(biāo)進(jìn)行檢測，確定該試劑盒在其儲(chǔ)存環(huán)境下的有效期為6個(gè)月。

開瓶穩(wěn)定性和凍融穩(wěn)定性試驗(yàn)：取連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒，將試劑盒開瓶后置于儲(chǔ)存環(huán)境中，于0、1、2、3、4、5、6個(gè)月對(duì)試劑盒的性能指標(biāo)進(jìn)行檢測，同時(shí)，在整個(gè)穩(wěn)定性考察時(shí)，有效期內(nèi)的反復(fù)凍融次數(shù)為6次，考察產(chǎn)品經(jīng)過反復(fù)凍融后，其產(chǎn)品性能有無變化。最終確定該試劑盒開瓶后可以穩(wěn)定存放3個(gè)月，反復(fù)凍融≤5次。

運(yùn)輸穩(wěn)定性試驗(yàn)：取連續(xù)三批生產(chǎn)的試劑盒，將試劑盒按照儲(chǔ)存溫度要求采用冷鏈運(yùn)輸，運(yùn)輸時(shí)長為4天，分別于運(yùn)輸前、退回公司后及有效期末對(duì)試劑盒的性能指標(biāo)進(jìn)行檢測，確定該試劑盒運(yùn)輸時(shí)限為3天。

三、臨床評(píng)價(jià)概述

申請(qǐng)人在中信湘雅生殖與遺傳?？漆t(yī)院、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院、山東大學(xué)附屬生殖醫(yī)院、中國福利院國際和平婦幼保健院四家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展了臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)采用考核試劑與臨床參考方法進(jìn)行比較研究的試驗(yàn)方法，確認(rèn)考核試劑的臨床有效性?？己嗽噭z測陽性的胚胎，對(duì)比確認(rèn)方法為FISH；考核試劑檢測陰性的胚胎，對(duì)比確認(rèn)方法為染色體核型分析，包括產(chǎn)前診斷羊水、流產(chǎn)組織或新生兒臍帶血的核型分析。

臨床試驗(yàn)共入組 1221 對(duì)符合適應(yīng)癥的受試者，考核試劑共檢測4640 例胚胎，檢測出陽性胚胎樣本 1494 例，陰性胚胎樣本3135 例，11 例未獲得有效檢測結(jié)果。其中陽性樣本總共完成 632例 FISH 驗(yàn)證，99 例陽性樣本由于未觀察到細(xì)胞樣本、檢測無結(jié)果或 FISH 試劑過期而脫落，共納入統(tǒng)計(jì) 533 例陽性胚胎。其中Chr13、Chr16、Chr18、Chr21 以及性染色體陽性驗(yàn)證例數(shù)為：Chr13（59 例）、Chr16（53 例）、Chr18（41 例）、Chr21（61 例）、 性染色體（47 例）；陰性胚胎樣本有 1058 例進(jìn)行了植入，569 例 成功妊娠，獲得 231 例核型分析檢查結(jié)果（其中羊水穿刺核型分析222例，流產(chǎn)組織核型分析1例，因方案偏離等原因剔除8例），共納入223例陰性胚胎。

通過對(duì)以上共533例FISH確認(rèn)的陽性樣本以及223例核型分析確認(rèn)的陰性樣本統(tǒng)計(jì)分析，待考評(píng)試劑盒的靈敏性為100%（95%CI：99.3%～100%），特異性為98.2%（95%CI：95.6%～99.5%）。陽性預(yù)測值為99.2%(95%CI：98.1%～99.8%)，陰性預(yù)測值為100.00%(95%CI：98.4%～100.00%)。由于本臨床試 驗(yàn)無法對(duì)所有陰性樣本以及陽性樣本全部進(jìn)行驗(yàn)證的特點(diǎn)，通過 對(duì)受試者的基線特征和入組胚胎的基線特征進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)受試者基線和入組胚胎基線在已驗(yàn)證與未驗(yàn)證樣本中均不具有顯著差 異，可以認(rèn)為在本產(chǎn)品檢測結(jié)果的統(tǒng)計(jì)中，完成驗(yàn)證的樣本能夠 代表總體樣本。

根據(jù)2002年衛(wèi)生部頒發(fā)的《胎兒染色體核型分析技術(shù)規(guī)范》要求核型分析的準(zhǔn)確率不低于98%。對(duì)已完成驗(yàn)證的樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出本產(chǎn)品總符合率為99.5%；利用基于二項(xiàng)分析的統(tǒng)計(jì)算法得出所有樣本的陽性預(yù)測值為99.2%，陰性預(yù)測值為100.0%，因此參考上述規(guī)范的要求，可認(rèn)為該產(chǎn)品達(dá)到了臨床診斷的準(zhǔn)確性要求。

綜上所述，該產(chǎn)品臨床試驗(yàn)資料對(duì)產(chǎn)品的臨床性能進(jìn)行了全面研究，臨床試驗(yàn)結(jié)果基本符合臨床應(yīng)用要求。申請(qǐng)人需在該產(chǎn)品上市后進(jìn)一步完成以下工作：上市后需繼續(xù)搜集至少10家臨床機(jī)構(gòu)、全部臨床使用數(shù)據(jù)作為臨床補(bǔ)充資料在產(chǎn)品下一次延續(xù)注冊(cè)時(shí)提交，繼續(xù)收集各染色體檢測異常情況（本試劑檢測陽性）及植入后（本試劑檢測陰性）結(jié)果情況，植入后的胚胎繼續(xù)追蹤其與臨床參考方法的檢測結(jié)果（核型分析/出生隨訪）的對(duì)比情況。該項(xiàng)臨床資料應(yīng)當(dāng)由出具數(shù)據(jù)各臨床機(jī)構(gòu)簽章。

四、產(chǎn)品收益風(fēng)險(xiǎn)判定

根據(jù)“YY/T0316-2016醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用”標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)該產(chǎn)品進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。

（一）受益評(píng)估

本產(chǎn)品用于定性檢測試管嬰兒過程中體外培養(yǎng)胚胎的囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞的脫氧核糖核酸（DNA），通過對(duì)胚胎部分細(xì)胞的DNA進(jìn)行檢測，分析胚胎染色體是否存在非整倍體數(shù)量異常，輔助臨床醫(yī)生判斷胚胎是否植入。本產(chǎn)品適用于女性年齡38歲及以上進(jìn)行試管嬰兒的患者；夫妻雙方或一方存在染色體異常的患者；三次以上的試管嬰兒植入失敗者；三次以上自然流產(chǎn)患者；生育過染色體異常患兒的夫婦。上述人群是胚胎染色體非整倍體高發(fā)人群，通過檢測結(jié)果來輔助判斷胚胎是否植入，減少因植入異常胚胎而造成的反復(fù)種植失敗、反復(fù)流產(chǎn)、出生缺陷等，減少患者生理、心理傷害及社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

（二）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

該試劑盒檢測結(jié)果會(huì)受到樣本來源、樣本采集過程、樣本運(yùn)輸條件等樣本因素的影響，同時(shí)也受到試驗(yàn)操作、試驗(yàn)環(huán)境、試劑儲(chǔ)存等試驗(yàn)因素的影響，可能導(dǎo)致數(shù)據(jù)質(zhì)量降低或檢測失敗。使用者須了解檢測過程中可能存在的潛在風(fēng)險(xiǎn)及檢測的局限性，詳見產(chǎn)品說明書中【檢驗(yàn)方法的局限性】。

不符合該試劑盒說明書中【樣本要求】的樣本或不恰當(dāng)?shù)脑囼?yàn)操作會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)質(zhì)量降低或檢測失敗，請(qǐng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書中【樣本要求】及【檢驗(yàn)方法】的要求操作和進(jìn)行試驗(yàn)過程質(zhì)控。

該試劑盒在檢測過程中涉及基因擴(kuò)增，在非可控的實(shí)驗(yàn)室操作可能由于環(huán)境中氣溶膠的存在導(dǎo)致結(jié)果不可靠，同時(shí)PCR操作過程中氣溶膠的泄露可能會(huì)導(dǎo)致設(shè)備甚至實(shí)驗(yàn)室的污染。因此，請(qǐng)?jiān)诳煽氐膶?shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測操作，操作人員必須進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)，嚴(yán)格按照說明書操作。

在現(xiàn)有技術(shù)條件下，該產(chǎn)品檢測結(jié)果僅輔助醫(yī)生判斷胚胎是否植入，胚胎植入后還將按照體外輔助生殖相關(guān)診療規(guī)程對(duì)植入胚胎的情況進(jìn)行產(chǎn)前檢測和產(chǎn)前診斷等。

（三）受益-風(fēng)險(xiǎn)的確定

通過環(huán)境控制、生產(chǎn)監(jiān)控、成品檢驗(yàn)和增加說明書警示內(nèi)容等防范措施，對(duì)該試劑盒的已知和可預(yù)見的安全風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行控制和降低，剩余風(fēng)險(xiǎn)可以被控制在可接受范圍內(nèi)，同時(shí)沒有帶來新的危害與安全風(fēng)險(xiǎn)。在目前認(rèn)知水平上，認(rèn)為該試劑盒上市帶來的受益大于風(fēng)險(xiǎn)。盡管目前認(rèn)為該試劑盒的受益大于風(fēng)險(xiǎn)，但是為保證用械安全，基于對(duì)主要剩余風(fēng)險(xiǎn)的防控，已在該試劑盒說明書中提示以下信息：

1.預(yù)期用途：該試劑盒適用于女性年齡38歲及以上進(jìn)行試管嬰兒的患者；夫妻雙方或一方存在染色體異常的患者；三次以上的試管嬰兒植入失敗者；三次以上自然流產(chǎn)患者；生育過染色體異常患兒的夫婦。

2.警示及注意事項(xiàng)：該試劑盒說明書中明確了該試劑盒【檢驗(yàn)方法的局限性】及使用中的【注意事項(xiàng)】。

?

綜合評(píng)價(jià)意見

?

本申報(bào)項(xiàng)目為境內(nèi)第三類醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊(cè)，屬于創(chuàng)新醫(yī)療器械（編號(hào)：201600088）。申請(qǐng)人的注冊(cè)申報(bào)資料符合現(xiàn)行要求，依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例》（國務(wù)院令第680號(hào)）、《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令2014年第5號(hào)）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)系統(tǒng)評(píng)價(jià)后，建議準(zhǔn)予注冊(cè)。申請(qǐng)人在該產(chǎn)品上市后需繼續(xù)搜集至少10家臨床機(jī)構(gòu)、全部臨床使用數(shù)據(jù)作為臨床補(bǔ)充資料在產(chǎn)品下一次延續(xù)注冊(cè)時(shí)提交，繼續(xù)收集各染色體檢測異常情況（本試劑檢測陽性）及植入后（本試劑檢測陰性）結(jié)果情況，植入后的胚胎繼續(xù)追蹤其與金標(biāo)準(zhǔn)檢測結(jié)果（核型分析/出生隨訪）的對(duì)比情況。該項(xiàng)臨床資料應(yīng)當(dāng)由出具數(shù)據(jù)各臨床機(jī)構(gòu)簽章。?

附件：產(chǎn)品說明書

胚胎植入前染色體非整倍體檢測試劑盒

（可逆末端終止測序法）說明書

?

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：胚胎植入前染色體非整倍體檢測試劑盒（可逆末端終止測序法）?

【包裝規(guī)格】

?42 測試/盒、96 測試/盒

【預(yù)期用途】

本產(chǎn)品用于定性檢測試管嬰兒過程中體外培養(yǎng)胚胎的囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞的脫氧核糖核酸（DNA），通過對(duì)胚胎部分細(xì)胞的DNA進(jìn)行檢測，分析胚胎染色體是否存在非整倍體數(shù)量異 常，輔助臨床醫(yī)生判斷胚胎是否植入。本產(chǎn)品適用于女性年齡38歲及以上進(jìn)行試管嬰兒的患 者；夫妻雙方或一方存在染色體異常的患者；三次以上的試管嬰兒植入失敗者；三次以上自然流產(chǎn)患者；生育過染色體異?；純旱姆驄D。

?染色體非整倍體是指單個(gè)染色體或多個(gè)染色體數(shù)目的增加或減少，是臨床上最常見的染色 體數(shù)目異常。試管嬰兒體外受精的胚胎中容易發(fā)生染色體非整倍體異常，異常胚胎植入女性子宮 可導(dǎo)致種植失敗、流產(chǎn)、出生缺陷等問題，通過胚胎植入前染色體非整倍體異常檢測（PreimplantationGeneticTestingforAneuploidies,PGT-A）可以減少植入染色體數(shù)目異常的胚胎，減 少因植入異常胚胎而造成的反復(fù)種植失敗、反復(fù)流產(chǎn)、出生缺陷等。臨床常見的染色體非整倍體 檢測技術(shù)包括熒光原位雜交技術(shù)（FluorescenceInSituHybridization,FISH），微陣列比較基因組雜交 技術(shù)(ComparativeGenomicHybridization,Array-CGH)，單核苷酸多態(tài)性芯片檢測技術(shù)（Single NucleotidePolymorphism,SNP-Array）。

檢測結(jié)果僅供參考，不單獨(dú)作為確診的依據(jù)，本產(chǎn)品不用于拷貝數(shù)變異的檢測。?

【檢驗(yàn)原理】

人類早期胚胎會(huì)發(fā)生較高頻率的染色體異常，其中以染色體非整倍體最常見。通過高通量 測序技術(shù)對(duì)胚胎細(xì)胞染色體DNA進(jìn)行檢測，利用生物信息學(xué)方法對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行分析，最終可 以獲得胚胎細(xì)胞中染色體數(shù)目的信息。本試劑盒對(duì)囊胚期活檢細(xì)胞樣本（3~10個(gè)）進(jìn)行全基因組 擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)DNA模板從pg級(jí)到μg級(jí)的均一性放大與富集。接著，對(duì)全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行片段 化和接頭連接。然后，采用PCR擴(kuò)增的方法對(duì)片段化產(chǎn)物加入標(biāo)簽序列并實(shí)現(xiàn)文庫的富集。使用 XP磁珠完成對(duì)文庫的純化，獲得片段大小為200~700bp的文庫分子；對(duì)文庫進(jìn)行測序和數(shù)據(jù)分析，即可獲得胚胎細(xì)胞中23對(duì)染色體數(shù)目異常的信息。

胚胎細(xì)胞全基因組擴(kuò)增通過低擴(kuò)增偏好的方式進(jìn)行，以盡可能無偏倚地保持樣本原始DNA信息。擴(kuò)增分三步進(jìn)行：裂解，預(yù)擴(kuò)增和擴(kuò)增。對(duì)胚胎細(xì)胞裂解后，使用特殊結(jié)構(gòu)的隨機(jī)引物及配套組分對(duì)基因組進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增，形成結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定的預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物，最后使用與預(yù)擴(kuò)增引物的非隨 機(jī)序列匹配的擴(kuò)增引物及配套組分對(duì)基因組進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。

?本試劑盒結(jié)合可逆末端終止法高通量測序技術(shù)和生物信息學(xué)分析方法對(duì)胚胎囊胚期活檢細(xì) 胞中染色體數(shù)目異常進(jìn)行定性檢測?？赡婺┒私K止測序技術(shù)的檢測過程包括：將不同熒光基團(tuán)標(biāo) 記的四種核苷酸以及DNA聚合酶同時(shí)加入流動(dòng)槽通道中，按堿基互補(bǔ)原理，合成互補(bǔ)的DNA 鏈；在堿基延伸過程中，每個(gè)循環(huán)反應(yīng)只能延伸一個(gè)正確互補(bǔ)的堿基，根據(jù)四種不同的熒光信號(hào) 確認(rèn)堿基種類，讀取該次反應(yīng)顏色后，堿基保護(hù)基團(tuán)被除去，下一個(gè)反應(yīng)可繼續(xù)進(jìn)行。最終，通 過對(duì)所有測序信號(hào)的分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA序列各個(gè)位點(diǎn)不同堿基的序列判定；并結(jié)合生物信息學(xué) 分析方法，對(duì)人類染色體所屬的DNA片段數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，將統(tǒng)計(jì)的結(jié)果與大量正常樣本構(gòu)成的 參考集合相比較，即可獲得檢測樣本中所含染色體DNA片段數(shù)量是否存在異常的信息，從而實(shí) 現(xiàn)對(duì)人類23對(duì)染色體數(shù)目異常的判斷，為臨床上選擇健康正常的胚胎提供輔助判斷。

【主要組成成分】

說明：不同批號(hào)試劑盒中各組份不可以互換。

自備試劑及儀器：?

1. ? AgencourtAMPureXPkit（BeckmanCoulter貨號(hào)：A63882）

2. ? QubitTMFluorometer（LifeTechnologies貨號(hào)：Q33218）

3.??QubitTMdsDNAHSAssayKits或QubitTM1×dsDNAHSAssayKits（LifeTechnologies貨號(hào)：Q33231）

4. ? QubitTMassaytubes（LifeTechnologies貨號(hào)：Q32856）?

5.胚胎染色體異倍體分析系統(tǒng)（北京中儀康衛(wèi)醫(yī)療器械有限公司，版本號(hào)：V1.01，醫(yī)療 器械注冊(cè)證書編號(hào)：）

【儲(chǔ)存條件及有效期】

1.試劑盒A部分于-20±5℃保存：試劑盒B部分于2-8℃保存。

2.未拆封試劑盒在上述儲(chǔ)存條件下有效期為6個(gè)月，試劑盒中冷凍保存組分可允許的凍融 次數(shù)≤5次，建議開封后的試劑盒在3個(gè)月內(nèi)使用完畢。?

【適用儀器】

MiSeqDx基因測序儀（Illumina）?

【樣本要求】

1.樣本類型：

囊胚期滋養(yǎng)層細(xì)胞活檢樣本。?

2.樣本采集：

樣本的采集：按照《體外受精-胚胎移植實(shí)驗(yàn)室技術(shù)》（人民衛(wèi)生出版社，2012.2）中“11.4.4 囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞活檢”來操作，細(xì)胞采集數(shù)3-10個(gè)。在顯微鏡下，將活檢后的胚胎細(xì)胞使用新鮮 培養(yǎng)基洗滌2次，再使用PBS緩沖液洗滌3次，然后將洗滌后的細(xì)胞（約含0.5μL1×PBS緩沖液） 小心轉(zhuǎn)移至裝有2.0μL1×PBS緩沖液的PCR管中。

3.樣本保存：

-20±5℃保存時(shí)間不超過3個(gè)月；樣本反復(fù)凍融次數(shù)不超過1次。應(yīng)盡快進(jìn)行擴(kuò)增。

4.樣本運(yùn)輸：

干冰條件下運(yùn)輸；須確保樣本送達(dá)時(shí)有足夠的剩余干冰，且有緩沖裝置，避免樣本管在運(yùn) 輸過程中被干冰冰塊擠破。

【檢驗(yàn)方法】?

1.??? 全基因組擴(kuò)增

1.1細(xì)胞裂解

1)??? 將細(xì)胞樣本冰上解凍并瞬時(shí)離心30s，用1×PBS緩沖液補(bǔ)至2.5μL，同時(shí)用2.5μL1×PBS緩 沖液作為擴(kuò)增的空白對(duì)照；

2)??? 向細(xì)胞樣本及空白對(duì)照中加入2.5μL的裂解液，瞬時(shí)離心，置于冰盒上；

3)??? 根據(jù)下表，在離心管中依次加入試劑，對(duì)裂解酶進(jìn)行稀釋，并使用移液器反復(fù)吹打混勻， 置于冰盒上；

向細(xì)胞樣本、空白對(duì)照管以及對(duì)照品管中加入5μL上一步制備的細(xì)胞裂解液混合物，瞬時(shí)離 心（禁止振蕩）；

注意：對(duì)照品包括對(duì)照品1、對(duì)照品2、對(duì)照品3

4)??? 在PCR儀上，按以下條件進(jìn)行反應(yīng)：75℃10分鐘，95℃4分鐘，25℃保持。?

1.2預(yù)擴(kuò)增

1)??? 根據(jù)下表，制備全基因組預(yù)擴(kuò)增混合物，并使用移液器反復(fù)吹打混勻；

2)??? 向1.1制備的裂解物加入5μL上一步制備的全基因組預(yù)擴(kuò)增混合物，瞬時(shí)離心；

3)??? 在PCR儀上，按以下條件進(jìn)行反應(yīng)：95℃2分鐘；

95℃ 15秒，15℃50秒，25℃ 40秒，35℃30秒，65℃40秒，75℃40秒；4℃保持；

4)??? 將全基因組預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物置于冰盒上。

1.3擴(kuò)增

1)??? 根據(jù)下表，制備全基因組擴(kuò)增混合物，并使用移液器反復(fù)吹打混勻；

2)??? 向1.2制備的全基因組預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物中加入上一步制備的全基因組擴(kuò)增混合物，顛倒混勻，瞬時(shí)離心；?

3)??? 在PCR儀上，按以下條件進(jìn)行反應(yīng)：95℃2分鐘；

95℃15秒，65℃1分鐘，75℃1分鐘；4℃保持；

? ? ? ? ? ? ? 14個(gè)循環(huán)

?4)??? 反應(yīng)結(jié)束立即將樣本從PCR儀上取出，將擴(kuò)增產(chǎn)物置于冰盒上，直至進(jìn)行下一步操作。

5)??? 擴(kuò)增產(chǎn)物-20±5℃保存不超過2個(gè)月。?

1.4全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物的質(zhì)量控制

1.4.1全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物的濃度測定：濃度測定采用Qubit?Fluorometer系統(tǒng)，檢測試劑為QubitTM

雙鏈DNA高靈敏度檢測試劑盒，具體操作步驟參照產(chǎn)品說明書。細(xì)胞樣本及對(duì)照品的濃度范圍為

20-80ng/μL；如果空白對(duì)照的濃度＜8ng/μL，表明空白對(duì)照質(zhì)量合格，將細(xì)胞樣本及對(duì)照品按照2、

3、4和5步驟進(jìn)行文庫構(gòu)建、測序和數(shù)據(jù)分析；如果空白對(duì)照的濃度≥8ng/μL，可對(duì)空白對(duì)照進(jìn)一步進(jìn)行人類基因組比對(duì)率（mapratio）質(zhì)量評(píng)價(jià)，按照1.4.2步驟進(jìn)行操作。

1.4.2對(duì)1.4.1步驟中濃度≥8ng/μL的空白對(duì)照擴(kuò)增產(chǎn)物分別按照2、3、4和5步驟進(jìn)行文庫構(gòu)建、 測序和數(shù)據(jù)分析，測序人類基因組比對(duì)率（map ratio）值應(yīng)不高于50%。

??

2.??? 文庫構(gòu)建

2.1? ?擴(kuò)增產(chǎn)物片段化和標(biāo)記

1)??? 預(yù)先取出轉(zhuǎn)座酶混合液和轉(zhuǎn)座酶緩沖液，將其置于冰盒上，融化后充分振蕩混勻，瞬時(shí)離 心；將轉(zhuǎn)座中和液恢復(fù)到室溫，振蕩混勻并確保沒有沉淀；

2)??? 將全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋至0.2ng/μL，渦旋振蕩15秒，瞬時(shí)離心；

3)??? 根據(jù)下表在0.2mLPCR管中依次加入試劑，并用移液器吹打混勻；

4)??? 將上步反應(yīng)液振蕩混勻15秒，瞬時(shí)離心，在PCR儀上按以下條件進(jìn)行反應(yīng)：

55℃ 5分鐘；10℃保持；

5)??? 當(dāng)反應(yīng)達(dá)到10℃時(shí)，取出反應(yīng)管立即加入5μL轉(zhuǎn)座中和液，振蕩混勻15秒，瞬時(shí)離心，室溫放置5分鐘。

2.2????? PCR擴(kuò)增

1)??? 預(yù)先取出PCR擴(kuò)增試劑和標(biāo)簽序列，室溫融化后充分振蕩混勻，瞬時(shí)離心；

2)??? 根據(jù)下表，在上一步片段化反應(yīng)管中依次加入以下試劑；

?

3)??? 將反應(yīng)液振蕩混勻15秒，瞬時(shí)離心，在PCR儀上按以下條件進(jìn)行反應(yīng)：

72℃ 3分鐘；95℃ 30秒，95℃ 10秒，55℃ 30秒，72℃ 30秒；72℃5分鐘，4℃保持。

提示：

????? 加入標(biāo)簽序列時(shí)須反復(fù)核對(duì)

????? 每次只打開一個(gè)管蓋，謹(jǐn)防標(biāo)簽序列交叉污染

2.3????? PCR產(chǎn)物純化

1)??? 預(yù)先取出AMPureXP磁珠，室溫平衡30分鐘，渦旋振蕩1分鐘，充分混勻；

2)??? 按樣本量配制80%的乙醇（80%乙醇須新鮮配制，配制量為500μL/樣本），顛倒混勻；

3)??? PCR反應(yīng)結(jié)束后，取出PCR管，瞬時(shí)離心，加入50μL磁珠，渦旋振蕩5秒，靜置5分鐘，瞬 時(shí)離心，再置于磁力架上靜置至液體澄清，小心吸棄上清；

4)??? 加入200μL新鮮配制的80%乙醇，慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)離心管兩圈，讓磁珠滾動(dòng)起來，再將離心管置于 磁力架上靜置，待液體澄清后，小心吸棄上清；

5)??? 重復(fù)步驟4）1次，進(jìn)行第2次乙醇洗滌；

6)??? 將離心管從磁力架上取出，瞬時(shí)離心，再放回磁力架上，用移液器將殘余的乙醇吸走，敞開管蓋，室溫晾干≤5分鐘；

重要提示：

????? 如磁珠過濕須延長室溫晾干時(shí)間

????? 避免磁珠過度干燥，如磁珠有裂紋出現(xiàn)須蓋好管蓋，并立即進(jìn)行下步試驗(yàn)操作

7)??? 將離心管從磁力架上取出，加入30μLDNA重懸液，吹吸5~10次將磁珠完全懸浮，渦旋振蕩5秒，靜置5分鐘，瞬時(shí)離心。將離心管放置于磁力架上靜置至澄清，吸取全部上清轉(zhuǎn)移到1.5mL管中，即為純化好的文庫。

注意：不要吸取磁珠。

8)??? 用Qubit方法測定文庫濃度，具體操作方法見操作步驟1.4；文庫濃度不得低于0.6ng/μL。

3.??? 測序模板制備

3.1? ?混合文庫

1)??將文庫稀釋到2nM，稀釋倍數(shù)=文庫濃度（ng/μL）×1515/450÷2(nM)，具體操作如下：

稀釋后渦旋振蕩15秒，瞬時(shí)離心；

2)? ?將每個(gè)稀釋至2nM的文庫各取5μL加入至同一個(gè)1.5mL離心管中，渦旋振蕩15秒，瞬時(shí)離心 即為混合文庫。

3.2? ?文庫變性

1)? ?將混合文庫混合均勻，根據(jù)下表在1.5mL離心管中依次加入試劑，渦旋振蕩15秒，瞬時(shí)離心：

?

室溫放置5分鐘，在上步變性管中加入980μL的雜交緩沖液，混勻，瞬時(shí)離心；

2)? ?文庫變性后濃度為20pM，進(jìn)一步用雜交緩沖液稀釋到12pM-15pM，根據(jù)下表比例進(jìn)行稀 釋，稀釋后渦旋振蕩15秒，瞬時(shí)離心，即為上機(jī)文庫。

4. ?? 上機(jī)測序 使用適用機(jī)型基因測序儀（MiSeqDx），按照儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢測。

5.??? 測序數(shù)據(jù)分析 將測序獲得的序列信息數(shù)據(jù)傳輸至《胚胎染色體異倍體分析系統(tǒng)》（北京中儀康衛(wèi)醫(yī)療器械有限公司研制及生產(chǎn)）運(yùn)行分析，獲得判讀結(jié)果。

1）統(tǒng)計(jì)質(zhì)控信息

人類基因組（human assemblyGRCh37/hg19)）比對(duì)后的原始數(shù)據(jù)使用samtools剔除基因組重復(fù)區(qū)域的序列（Reads），以避免重復(fù)序列對(duì)分析結(jié)果造成影響。同時(shí)去除比對(duì)質(zhì)量（Map?Quality）低于8、多匹配和非完全匹配到染色體上的堿基序列，以確保測序數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性以及每條堿基序列定位的唯一性，從而得到有效序列。根據(jù)得到的序列，統(tǒng)計(jì)樣本中唯一匹配序列數(shù)（UniqueReads）、堿基覆蓋度（Coverage）、序列總數(shù)（Total reads）、線粒體比例（MT Ratio）、比對(duì)率（MapRatio）、冗余度（Duplication）和GC含量（GCRatio）等。

2）GC校正 將上一步得到的有效序列分配到事先劃分好的200kb片段大小的基因組非重疊區(qū)域（窗口）中，然后進(jìn)行GC校正，詳細(xì)步驟為：首先計(jì)算每個(gè)窗口區(qū)域的基因組GC含量；然后以樣本所有窗口的序列數(shù)平均數(shù)與該GC含量水平內(nèi)窗口序列平均數(shù)的比值作為窗口GC校正權(quán)重，重新計(jì)算窗口序列含量（Reads Count，RC）。

3）均一化校正 對(duì)每個(gè)樣本測序數(shù)據(jù)量進(jìn)行均一化后計(jì)算窗口的檢測信號(hào)值（RCid），計(jì)算公式如下：

RCi為染色體第i個(gè)窗口的RC值；正常樣本RCid理論值為20。

4）隱馬爾可夫模型分區(qū)

經(jīng)過校正的檢測信號(hào)值，使用隱馬爾可夫模型（HiddenMarkovModel，HMM）計(jì)算判定其 異倍性。設(shè)定染色體狀態(tài)為五種：0、10、20、30和40，分別代表缺失、單倍體、二倍體、三倍 體和四倍體。相同狀態(tài)間的轉(zhuǎn)移概率設(shè)為0.999，不同狀態(tài)間的轉(zhuǎn)移概率為0.00025。通過統(tǒng)計(jì)已 知核型樣本的各窗口RCid值，計(jì)算得到HMM計(jì)算中所需要的發(fā)射概率矩陣，通過轉(zhuǎn)移概率矩陣 和發(fā)射概率矩陣及校正后樣本的RCid值計(jì)算樣本中各染色體片段的拷貝數(shù)狀態(tài)概率，預(yù)測每個(gè)片 段區(qū)域的拷貝數(shù)狀態(tài)。根據(jù)連續(xù)片段區(qū)域的狀態(tài)對(duì)片段區(qū)域進(jìn)行分區(qū)。

5）判斷結(jié)果

計(jì)算染色體所包含窗口檢測信號(hào)值（RCid）的平均值作為整條染色體的檢測信號(hào)值（RCid），根據(jù)參考范圍判斷染色體拷貝數(shù)，生成報(bào)告結(jié)果，修改數(shù)據(jù)分析狀態(tài)，并將分析結(jié) 果返回到報(bào)告查看界面。計(jì)算分區(qū)信號(hào)值（RCid），根據(jù)參考范圍判斷分區(qū)拷貝數(shù)，若為異常則進(jìn)行提示。

6）查看報(bào)告

a)? 若檢測樣本中的某條染色體的RCid值≥26.97或≤12.97，則表示該樣本的該染色體存在 非整倍體異常，否則表示該次檢測未發(fā)現(xiàn)非整倍體異常。

b) ?若某條染色體的RCid值為0，應(yīng)判定為此樣本未檢測出該染色體，同時(shí)對(duì)于常染色體而言，此種檢測結(jié)果為陽性純合缺失，對(duì)于性染色體而言，此種檢測結(jié)果應(yīng)將X、Y檢測結(jié)果共同判斷；

c)對(duì)于X、Y染色體檢測結(jié)果應(yīng)共同判斷，若X染色體檢測結(jié)果為單體同時(shí)Y染色體檢測結(jié) 果為單體，則此樣本X、Y染色體檢測結(jié)果應(yīng)判定為未發(fā)現(xiàn)非整倍體異常，不能分別判定為單體 陽性（非整倍體異常）；

d) ?本產(chǎn)品對(duì)于某些染色體多倍體陽性的情況，檢測結(jié)果均表示為三體陽性。

6.??? 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

6.1 ??每個(gè)樣本的唯一比對(duì)有效數(shù)據(jù)量（reads數(shù)）≥1M；

6.2 ??每個(gè)樣本的基因組覆蓋度≥4%；

6.3 ??對(duì)照品1的檢測結(jié)果為21號(hào)染色體三體；

6.4 ??對(duì)照品2的檢測結(jié)果為性染色體單體；

6.5 ??對(duì)照品3的檢測結(jié)果為陰性。

以上需要同時(shí)滿足。

?

【參考范圍】

通過Z值法確定樣本參考范圍，并經(jīng)350例陰性囊胚活檢樣本和400例陽性囊胚活檢樣本測序分析驗(yàn)證，計(jì)算每個(gè)樣本的24條染色體的RCid值，最終確定參考值的范圍。對(duì)于臨界值樣本，我 們通過對(duì)臨床樣本及企業(yè)參考品進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，從而得出臨界值范圍的上下限。

根據(jù)本試劑盒的研究資料，確定樣本染色體RCid值的參考范圍如下表所示。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】?

1. ?? 常染色體：常染色體的Rcid≤12.97或RCid≥26.97，分別表明檢測樣本的該條染色體為單體或三體（某條染色體多倍體陽性的情況，檢測結(jié)果均表示為三體），即該條染色體存在非 整倍體異常。

2. ?? 性染色體：當(dāng)X染色體的RCid值為12.97＜RCid＜26.97，且Y染色體的RCid值為0；或X、Y 染色體的Rcid值均≤12.97且不為0時(shí)，表明性染色體未見非整倍體異常，其他情況均為存在 非整倍體異常。

3. ?? 當(dāng)任意1條染色體的RCid值為23.17＜RCid＜26.97或者12.97＜RCid＜17.90時(shí)，表明該染色體 為二體，但可能存在染色體片段異?；蚯逗巷L(fēng)險(xiǎn)，可結(jié)合其他臨床指征處理。

?

【檢驗(yàn)方法的局限性】

1.本試劑盒只用于檢測染色體數(shù)目異常，檢出結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨(dú)作為確診或者排除病例的依據(jù)。

2.本試劑盒不能用于夫妻一方為平衡易位、染色體結(jié)構(gòu)異常等造成的胚胎染色體結(jié)構(gòu)變異的?檢測。

3.對(duì)于小于等于4M的染色體拷貝數(shù)變異及嵌合比例不大于30%嵌合體樣本，本試劑盒檢出率 較低。

4.本試劑盒不能檢測單倍體、三倍體、多倍體等全部染色體整倍增加或減少的異常。

5.在少數(shù)情況下，鑒于當(dāng)前醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)水平、個(gè)體差異以及樣本運(yùn)輸?shù)仍?，可能?dǎo)致部 分胚胎樣本無法檢測。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

國家參考品/企業(yè)參考品檢測

1.建庫質(zhì)量?

采用國家參考品或經(jīng)標(biāo)化的企業(yè)參考品，試劑盒文庫構(gòu)建失敗率不超過3.0%。

2.數(shù)據(jù)量控制?

采用數(shù)據(jù)量控制國家參考品或經(jīng)標(biāo)化的企業(yè)參考品，檢測的唯一比對(duì)有效數(shù)據(jù)量應(yīng)不低于1M，基因組覆蓋率不低于4%。在滿足建庫質(zhì)量和數(shù)據(jù)量控制前提下，達(dá)到下列技術(shù)指標(biāo)：

3.陽性參考品符合率?

采用國家參考品或經(jīng)標(biāo)化的企業(yè)參考品，異常片段大小大于4M的陽性參考品對(duì)應(yīng)的染色體異常要求檢出率達(dá)到100%，異常片段大小小于等于4M的陽性參考品對(duì)應(yīng)的染色體異常檢出率要求 達(dá)到50%以上。

4.陰性參考品符合率?

采用國家參考品或經(jīng)標(biāo)化的企業(yè)參考品，陰性參考品應(yīng)不得檢出染色體異常。

5.嵌合體參考品符合率

采用國家參考品或經(jīng)標(biāo)化的企業(yè)參考品，對(duì)30%嵌合的嵌合體樣本檢出率應(yīng)達(dá)到30%以上， 70%嵌合體樣本檢出率應(yīng)達(dá)到60%以上。

6.重復(fù)性

高通量測序檢測系統(tǒng)使用同一批次試劑盒進(jìn)行三次重復(fù)試驗(yàn)，要求三次試驗(yàn)結(jié)果在滿足建庫質(zhì)量和數(shù)據(jù)量控制前提下，每次均滿足1-5 檢測要求。

7.臨床試驗(yàn)情況

臨床試驗(yàn)采用對(duì)比驗(yàn)證試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每例納入統(tǒng)計(jì)的樣本均采用本試劑盒和金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比驗(yàn)證方法進(jìn)行檢測。染色體非整倍體陽性金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比驗(yàn)證方法為熒光原位雜交(FISH)；染色體非整倍體陰性金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比驗(yàn)證方法為染色體核型分析，包括產(chǎn)前診斷羊水穿刺核型分析、流產(chǎn)組織核 型分析。

本試劑盒臨床試驗(yàn)篩選1221對(duì)受試者夫妻入組并完成檢測，在1221對(duì)受試者夫妻的4640例胚胎樣本中，檢測出染色體非整倍體陽性1494例，染色體非整倍體陰性3135例。陽性樣本FISH驗(yàn)證533例，陰性樣本隨訪到核型分析檢查結(jié)果223例。通過對(duì)受試者和胚胎的基線特征分析，表明本臨床試驗(yàn)的受試者及胚胎能夠代表臨床的實(shí)際情況，本試劑盒已驗(yàn)證樣本的統(tǒng)計(jì) 分析結(jié)果具有臨床意義。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，與金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照方法相比，本試劑盒檢測胚胎染色體非整倍體的靈敏性為100%（95%CI：99.00%-100%），特異性為98.2%（95%CI：95.6%~99.5%），準(zhǔn)確性為99.5%（95%CI：98.7%~99.9%）；本試劑盒檢測胚胎染色體非整倍 體的陽性預(yù)測值為99.2%(95%CI：98.1%～99.8%)，陰性預(yù)測值為100.0%(95%CI：98.4%～ 100.0%)；進(jìn)行Kappa一致性檢驗(yàn)，Kappa=0.99（p＜0.01）），顯示本試劑盒與金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照方法具有良好的檢測一致性。

?

【注意事項(xiàng)】?

1.本產(chǎn)品僅用于體外診斷。

2.臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)（2010）194號(hào)）等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。試驗(yàn)人員必須進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)，嚴(yán)格按照說明書操作，按照試驗(yàn)過程嚴(yán)格分區(qū)進(jìn)行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備 區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)），試驗(yàn)操作的每個(gè)階段使用專用的儀器和設(shè)備，各區(qū)各階段用品不能交叉使用。

3.操作注意安全防護(hù)。樣品提取應(yīng)在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)場所進(jìn)行，穿戴防護(hù)衣物、一次性手套和口 罩，所有直接接觸過樣品的物體應(yīng)進(jìn)行消毒后丟棄或再次使用。

4.所使用的接觸試劑的材料均要求干燥、潔凈，以防止污染。試驗(yàn)過程中所涉及的耗材為一 次性使用，不得重復(fù)使用。

5.使用前，液體試劑應(yīng)混合均勻，盡量避免反復(fù)凍融。

6.操作過程中，盡量減少熒光試劑的曝光時(shí)間。

7.本試劑一次性使用，不同批號(hào)試劑禁止交叉使用，請(qǐng)勿使用過期試劑。

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【基本信息】

注冊(cè)人/生產(chǎn)企業(yè)名稱：北京中儀康衛(wèi)醫(yī)療器械有限公司

住所：北京市大興區(qū)中關(guān)村科技園區(qū)大興生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)基地天榮街19號(hào)院6幢204室?

聯(lián)系方式：010-68056969

售后服務(wù)單位名稱：北京中儀康衛(wèi)醫(yī)療器械有限公司?

聯(lián)系方式：010-68056969

生產(chǎn)地址：北京市大興區(qū)中關(guān)村科技園區(qū)大興生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)基地天榮街19號(hào)院6幢204室

【醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證編號(hào)】

【醫(yī)療器械注冊(cè)證書編號(hào)】

【產(chǎn)品技術(shù)要求編號(hào)】

【說明書核準(zhǔn)及修改日期】